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工艺开发

我们可以为不同靶向性（肝、脾）、不同制剂形式（冷冻剂型、冻干剂型）的mRNA-LNP提供GMP生产工艺流程的开发及优化。

菌种三级建库

GMP条件下的高稳定性三级建库，提供建库报告、传代稳定性分析、全面的质检标准。自主知识产权的菌种具有高传代稳定性、高传代倍数的PolyA尾丢失率<10%。

质粒工艺开发

稳定、可靠的发酵和纯化工艺，可达到高纯(>90%)、低杂、重组率<5%、高产量，工艺开发过程完整、记录清晰可追溯。全套分析方法：超螺旋比例、重组率、质粒拷贝数、活菌数、宿主DNA /RNA/蛋白残留、测序、卡那霉素残留、微限、内毒素等                                    。

原液工艺开发

结合高保真T7聚合酶，可控的dsRNA含量。稳定、可靠的IVT和纯化工艺，高纯、低杂、高产量、工艺完整、记录清晰可追溯。纯度>90%，加帽率 >90%，双链残留≤1μg/mg mRNA。 

全套原液相关质检方法：mRNA纯度（CE、HPLC）、加帽率、测序、polyA尾长、dsRNA含量、总蛋白残留、模板残留、体内活性研究、体外活性研究、微限、内毒素等。

制剂工艺开发

稳定、可靠的制备及纯化工艺，高包封率、可控粒径、分散性小、工艺完整、记录清晰可追溯。冷冻制剂可在<-60°C保存超2年。包封率>85%，粒径 <150 nm。

依诺特色制剂冻干工艺，可满足不同mRNA及LNP组合冻干需求，制剂2-8°C储运效期>2年，室温储运效期>1年。使用前复溶即可，方便快捷，可及性高。包封率>80%，粒径<150 nm。
全套制剂相关质检方法：mRNA含量、包封量、粒径、电位、解离常数、微观形态、mRNA纯度、脂质含量和鉴别、水分、内毒素、无菌、乙醇残留、柠檬酸残留、体内外生物学活性分析、纳米流式分析（空载率、核酸拷贝数）等。

工艺相关检定项目及方法

加帽率检测

使用LC-MS法检测加帽率，可以根据产物分子量精准定位uncapped产物、capped产物（cap1 、cap1-A、cap1+G），计算各产物的响应值和占比得到加帽率，是公认的加帽率准确的检测方法。其方法原理是设计特异性的探针与mRNA 5＇端序列配对结合，使用RNase H酶对结合后的5＇端特异位点进行酶切（酶切位置可能会出现-A或者+G的位移），使用磁珠纯化后，上机LC-MS。HPLC可以实现mRNA的Cap主峰与探针的分离，MS（Q-Tof检测器）可以对Cap主峰的各产物分离定量。分析uncapped峰和capped峰的占比，可以计算得到产品的加帽率。依诺生物的mRNA产品均具有极高的加帽率。

PolyA尾展示

使用LC-MS法检测mRNA产品polyA尾的分布，可以根据产物分子量，可以精准定位到1个nt的长度差别，计算不同长度的polyA尾的响应值和占比，可以得到整体polyA尾的分布情况，是目前polyA尾最优的检测方法。其方法原理是设计特异性的探针与mRNA 3＇端序列配对结合，使用RNase H酶对结合后的3＇端特异位点进行酶切（酶切位置可能会出现-G的位移），使用磁珠纯化后，上机LC-MS。HPLC可以实现mRNA的polyA尾主峰与探针的分离，MS（Q-Tof检测器）可以对mRNA的polyA尾主峰的各产物分离定量。根据分子量精准定位，可以分析得到不同序列长度的polyA尾的占比。依诺生物的mRNA产品，polyA尾长度高度集中在设计长度。

依诺生物专业团队，拥有10余年mRNA专业研发经验，并已成功推动mRNA传染病疫苗、mRNA药物在多个国家和地区获批开展临床试验。依诺生物的专家团队可提供一体化解决方案，覆盖mRNA产业链的全部环节，依托公司运营多年的IPD体系，为客户提供优质的服务。