mRNA优化与合成
依诺生物提供高得率和高性价比的mRNA和长链RNA（多个碱基）的定制合成服务，在微克到毫克的级别上，开展广泛的mRNA修饰服务。mRNA 的取得可从客户提供的DNA模板生成，也可直接交由我们从零开始， 提供完整的mRNA序列优化及体外合成。我们为所有的标准mRNA片段进行5-甲基-胞嘧啶(5-Methyl-CTP) / 假尿苷（Pseudo-UTP/ψ），Cap加帽或修饰核苷酸的处理。
mRNA序列的基本结构及其潜在改造方式
mRNA优化与合成服务流程
服务特色
mRNA合成个性化服务
自行提供基因序列，序列优化，自主选择Cap类型，mRNA修饰类型以及荧光标记等。
针对特定应用给出设计和优化建议
加帽: 高效经济的共转录加帽技术，生成Cap结构
polyA尾: 长度可定制
核苷酸修饰
核苷酸修饰
mRNA分子修饰，提高特定应用的活性
加帽: 高效经济的共转录加帽技术，生成Cap结构
polyA尾: 长度可定制
核苷酸修饰
核苷酸修饰
根据不同客户对mRNA项目需求，提供多种纯化工艺供选择
mRNA试剂盒纯化
dsRNA去除
服务详情
订购量
研究级：0.1-20mg 临床前：1-20mg
其它订购量支持定制
其它订购量支持定制
5´端加帽
无上限
Cap1
Cap1
3'端PolyA尾
No Tail
120A Tail
支持定制
120A Tail
支持定制
NTP修饰类型
N1-甲基假尿苷
假-UTP 5-甲基I-CTP Cy3-UTP
;Cy5-UTP;Cy5.5-UTP系列
假-UTP 5-甲基I-CTP Cy3-UTP
;Cy5-UTP;Cy5.5-UTP系列
纯化方式
研究级：LiCl沉淀;柱纯化
临床前：亲和层析和切向流结合
临床前：亲和层析和切向流结合
质量控制
研究级：标准/升级QC
临床前：标准/升级QC
临床前：标准/升级QC
我们可提供的IVT mRNA等级
科研级别mRNA
科研级别mRNA适用于基础研究及药物发现研究。此级别mRNA在标准的实验室环境下生产，通过严谨的质量控制流程确保客户获得高质量的mRNA，以符合各类下游研究的应用。
GMP-like mRNA
GMP-like mRNA适用于临床前研究阶段，如在动物体内测试药物安全性和代谢的研究。此级别mRNA基本按GMP指南关键要求进行生产，生产工艺和质量标准要求均相当，也是在独立受控的生产设施单元内生产，生产过程信息有详细规范的记录，确保可追溯。GMP-like级别可看作是小规模GMP产品的模拟生产，由此价格相较GMP更低，周期也更短。在适当情况下，GMP-like mRNA可以在无抗生素、无动物源、无RNA酶的体系下进行生产和纯化。每批产品放行都会提供COA。TSE/BSE声明如需亦可提供。
| 科研级别 | GMP类 | |
|---|---|---|
| 应用 | 基础研究应用、新药研发、临床前研究等 | 临床前研究，比如在动物体内的药物安全性测试或者代谢测试等 |
| 规格 | mRNA：0.1-10mg LNP：0.1-3mg | mRNA：0.01-1g LNP：3-20mg |
| 周期 | 35~65天 载体设计和克隆：20~30天 质粒生产和线性化：7~14天 IVT mRNA生产：7~14天 LNP封装：7~9天 冻干：7~14天 | 60~100天 载体设计和克隆：25~35天 质粒生产和线性化：10~25天 IVT mRNA生产：14~28天 LNP封装：14~21天 冻干：14~21天 |
| 质量规范体系 | ISO9001 | 适用于GMP体系的ISO9001 |
| 生产设施 | 在共享的实验室区域中并行生产 | 在分离的单元模块中单独生产 |
| 文件控制和可追溯性 | 否 | 是 |
| QC项目与放行 | 标准QC（见下表） | 根据每个项目的具体需求执行 |
| 无菌灌装 | 不适用 | 按需提供 |
| 保留样本 | 按需提供 | 按需提供 |
| 额外交付内容 | COA协议 |
|
QC标准
注: 升级QC均需要支付额外费用
应用实例
CDS优化显著增强mRNA细胞翻译
实验过程：在293T/17细胞，分别转染优化前和优化后（CDS AI算法优化）的B型流感病毒Hemagglutin mRNA，12孔板，2ug/孔，每种mRNA两个平行，转染48h后进行WB检测。
实验结果：如上图所示，依诺CDS算法优化后的mRNA相比优化前mRNA表达的蛋白水平显著提高。
实验结果：如上图所示，依诺CDS算法优化后的mRNA相比优化前mRNA表达的蛋白水平显著提高。
UTR优化显著提升mRNA体内表达
实验过程：分别静脉注射优化前和优化后（从依诺UTR库中选择）的Luciferase mRNA(n=5, 每只小鼠5μg, 包裹成LNP递送)，48h后IVIS成像观察。
实验结果：如上图所示，相比优化前，UTR优化后的mRNA体内表达强度明显提升。
实验结果：如上图所示，相比优化前，UTR优化后的mRNA体内表达强度明显提升。
使用CE法和SEC-HPLC法表征，mRNA均具有高纯度
使用共转录一步加帽法进行加帽，cap具有自主知识产权，使用LC-MS检测加帽率，产品具有极高的加帽率。
可以稳定合成100nt以上的polyA尾，可以根据客户需求合成不同长度的polyA尾，使用LC-MS检测不同长度polyA尾的分布，产品polyA尾长度高度集中在设计长度。
